Спасибо, ваше сообщение принято.

Наши менеджеры обработают его
и свяжутся с Вами максимально быстро.

Корзина пуста

Перспективы использования аллогенных мультипотентных механизмов стволовых клеток для жирового трансплантанта от тканевой резорбции
30.05.2013

Перспективы использования аллогенных мультипотентных механизмов стволовых клеток для жирового трансплантанта от тканевой резорбции

Аутологическая трансплантация жировой ткани (липофилинг) является распространенным методом коррекции контурных эстетических и косметических дефектов поверхностных мягких тканей.

Несмотря на преимущества данного метода, есть и недостатки, связанные, прежде всего, с рассасыванием трансплантированной ткани и ее последующим фиброзированием.

В научной литературе широко обсуждается возможность использования ММСК, выделенных из жировой ткани, для защиты трансплантата от тканевой резорбции. Однако, изучен вопрос о влиянии трансплантации аллогенных ММСК на процессы приживления и функционирования аутологической жировой ткани, если аутологический клеточный материал использовать для выделения и культивирования до необходимой действенной клеточной массы невозможно или есть потребность в быстром получении клеточного трансплантата.

Экспериментальное исследование проведено с использованием самок мышей линии FVB («дикий тип») и FVB-Cg-Tg (GFPU) 5Nagy /J (трансгенные по гену зеленого флуоресцентного белка - GFP), массой тела 25-30 г., содержавшихся в стандартных условиях вивария. Эксперимент проведен с соблюдением требований биоэтики и норм биологической безопасности. Аллогенные ММСК получали путем клеточного культивирования из жировой ткани трансгенных по гену GFP мышей, изъятой из паховой области после эвтаназии.

Адипогенное дифференцирование осуществляли путем посева клеток в 6-луночный планшет в концентрации 5 х 103/см2. Через 24 ч. рабочую питательную среду заменяли на дифференциальную питательную среду, состоящее из DMEM-LG, 10% FBS, 1% антибиотика (цефтриаксон), 50 мкмоль индометацина, 1 мкмоль дексаметазона, 0,5 ммоль ИВМХ. Дифференциальное питательную среду заменяли через каждые 72 ч. в течение 28 суток.

В течение этого периода изучали изменения активности пролиферации клеток, их морфологии, отмечали интервалы изменений характеристик культуры. Фиксированный монослой клеток окрашивали с использованием Oil Red О и гематоксилин и эозин.

Гетеротропические трансплантации фрагментов подкожной жировой ткани у лабораторных мышей линии FVB осуществляли путем пересадки фрагмента жировой клетчатки с паховой области под кожу по обе стороны от позвоночника, формируя ложе для аутотрансплантатов.

Животным с одной стороны пересаживали клеточно-тканевой трансплантат, состоящий из аутологичной жировой ткани и аллогенного клеточного материала (из расчета 0,5 х 106 клеток), с противоположной стороны - аутологичной материал, в который вводили аналогичный по объему изотонический раствор натрия хлорида. Через 14 и 28 дней эксперимента животных выводили из эксперимента путем цервикальной дислокации предварительной наркотизацией парами эфира.

Выделенные трансплантаты жировой ткани взвешивали, промывали в 1 мл. изотонического раствора натрия хлорида и фиксировали для дальнейшего исследования в 4% растворе параформальдегид на фосфатно-солевом буфере (рН 7,4) в течение 24 час.

Применяли гистологические, иммуногистохимические, морфометрические и статистические методы исследования.

Результаты исследования культуры клеток, выделенных из жировой ткани, свидетельствовали о преобладании клеток диаметром до 80 мкм., содержащих значительное количество вакуолей и гранул. Именно эти клетки имели фибробластоподобную структуру, характеризовались высокой адгезивностью, колониеобразованием, которые способны пролифировать в культуре более 72 раза. С целью определения возможности дифференцировки клеток в адипогенном направлении осуществляли направленную индукцию. При культивировании клеток в ангиогенной питательной среде в них образовывались липидные вакуоли, которые имели тенденцию к слиянию и образованию единого жирового включения, формируя "кольцо-печать", характерную для зрелых адипоцитов.

Ядро смещено к периферии, цитоплазма представлена ​​узким ободком, клетка приобретала шаровидную форму. Кроме того, в клетках накапливались нейтральные жиры, а сами клетки образовывали кластеры адипоцитов. Подобные морфологические превращения клеток свидетельствовали о вступлении характерных признаков жировой ткани - адипоцитов, что подтверждено окраской Oil Red О и гематоксилином. По данным морфометрического анализа, 75% клеток в культуре дифференцировались в адипогенном направлении.

Результаты эксперимента in vitro позволили перейти к второй части исследования, а именно определение возможности использования аллогенных ММСК жировой ткани для защиты пересаженного жирового трансплантата от тканевой резорбции. Через 2 недели после гетеротопической аутологичной трансплантации фрагментов жировой ткани вместе ММСК наблюдали достоверно (Р = 0,05) меньше дефицит массы клеточно-тканевого трансплантата по сравнению с таким, в которое не трансплантировали ММСК.

На 4-й неделе после пересадки наблюдали противоположную тенденцию: дефицит массы тканево-клеточного и тканевого трансплантатов составлял соответственно (55,0 ± 22,1) и (33,6 ± 21,2)% (Р = 0,05). По данным проведенного в 2-й неделе эксперимента гистологического исследования фрагментов трансплантатов как клеточно-тканевых, так и с введенным изотоническим раствором натрия хлорида, проявляли участки лизиса адипоцитов, отек периваскулярного пространства и лимфоцитарно-макрофагальная инфильтрация.

На 4-й неделе в биоптатах отмечали участки фибриноидного некроза, кальцификации, сладж эритроцитов, гиалиноз стенки сосудов.

Участки некроза и инфильтрационный отек жировой ткани более выражены в клеточно-тканевых трансплантатов, чем в тканевых.

По данным морфометрического анализа, при введении в жировую ткань ММСК наблюдалась тенденция к увеличению интенсивности некроза адипоцитов по сравнению с таковой при введении изотонического раствора натрия хлорида. Интенсификацию некроза адипоцитов (почти в 3 раза) в жировых трансплантатов отмечали на 2-4-й неделе после гетеротопической пересадки.

Вероятно, гетеротопическая трансплантация фрагментов жировой ткани вместе с ММСК обусловливает интенсификацию воспалительного процесса, некроз адипоцитов, что способствует ускорению формирования деструктивных процессов в трансплантат.

В клеточно-тканевом трансплантате уже к 2-й недели эксперимента наблюдали дегенеративно-дистрофические процессы, которые обусловили накопление внеклеточной воспалительной жидкости и ошибочно положительную стабилизацию массы трансплантата. В тканевом трансплантате процессы резорбции начинаются более активно, без инфильтративно-воспалительного периода, что приводит постепенную и стабильную потерю массы трансплантата

На 4-й неделе процессы тканевой резорбции постепенно стабилизируются, а в тканево-клеточном трансплантате - активно продолжаются вследствие деструкции адипоцитов и потери внеклеточной жидкости. Кроме того, можно предположить формирование иммунного ответа на антигены ММСК, или продукты секреции или распада этих клеток стимулируют макрофимгальнолимфоцитарную инфильтрацию.

На 2-й и 4-й неделе после гетеротопической пересадки клеточно-тканевого трансплантата по данным иммуногистохимического исследования в биоптате проявляли трансплантированные ММСК, количество которых на 4-й неделе эксперимента достоверно увеличивалась (Р <0,05), стволовые клетки содержались преимущественно в стенках мелких сосудов, что позволяет предположить эндотелиальный направление дифференцировки клеток и свидетельствует об отсутствии отторжение клеточного материала. Аллогенные ММСК, трансплантированные совместно с жировой тканью, способны к миграции. По данным иммуногистохимического исследования в контралатеральной жировом трансплантате, в который вводили изотонический раствор натрия хлорида, обнаружены донорские ММСК.

Клетки, которые мигрировали, локализовались преимущественно в стенках мелких и среднего диаметра сосудов.

Результаты проведенного исследования свидетельствуют, что клетки, выделенные из жировой ткани, способны in vitro к дифференцировке в адипогенном, a in vivo - в эндотелиальном направления, открывает значительные перспективы их использования в регенераторно-восстановительной медицине. Однако, пересадки аллогенных ММСК для защиты жирового трансплантата от тканевой резорбции не достигает поставленной цели. Введение в жировой трансплантат аллогенных ММСК вызывает усиление процессов воспаления, некроз адипоцитов, и, как следствие, усиление тканевой резорбции и дефицит массы трансплантата.

Полученные результаты свидетельствуют о необходимости проведения дальнейших экспериментальных исследований и исследования течения репаративных процессов в пересаженном клеточно-тканном трансплантате только аутологичного происхождения.

После проведенного исследования стало ясно, что клетки, выделенные из жировой ткани, способны к дифференцировке в адипогенное направление при условии культивирования в индукционной среде. Совместное пересадки жировой трансплантата и ММСК, выделенных из аллогенной жировой ткани, вызывает активацию в нем деструктивно - воспалительных процессов, ухудшения выживаемости адипоцитов и в дальнейшем - значительный дефицит массы трансплантата.

Результаты экспериментальных исследований свидетельствуют о нецелесообразности использования в клинической практике клеточно-тканевого трансплантата, состоящего из аллогенного донорского материала и аутологической жировой ткани.

Ю. В. Поляченко, К.М. Запольска, Р.В. Салюты, А. В. Кучук, В.М. Кирик,
П. П. Клименко, Г. М. Онищенко, В. А. Шаблий
Национальный институт хирургии и трансплантологии имени А. А. Шалимова НАМИ Украины, г. Киев,
Институт генетической и регенеративной медицины НАМИ Украины, г. Киев,
Координационный центр трансплантации органов, тканей и клеток Минздрава Украины, Институт клеточной терапии, г. Киев

Имя: *
Е-mail: *
Отзыв: *
Код защиты: * Сменить код
* - поля, обязательные для заполнения
Статьи
Офтальмология
Конъюнктивит - Что делать с красными глазами?
Конъюнктивит - Что делать с красными глазами?...
Возможные причины настолько разнообразны, что проблемы со зрением долж...
Кардиология и сосудистые заболевания
Коррекция обмена липидов при атеросклерозе
Коррекция обмена липидов при атеросклерозе...
Многочисленные эпидемиологические исследования подтвердили наличие пря...
Дерматология (микология, трихология)
Современные подходы к терапии больных псориазом с
Современные подходы к терапии больных псориазом с ...
Несмотря на большое количество предложенных методов лечения больных ра...
Новые медицинские учреждения
  • Интернет-магазин
  • SKYDENT
  • «Аксимед» — Клиника современной неврологии
  • Студия красоты и развития
  • Алтес - Сумы
  • Мед Люкс Детокс
  • DietCenter
  • Лико-Мед
  • Сучасна стоматологія Денітка- Луцьк