Спасибо, ваше сообщение принято.

Наши менеджеры обработают его
и свяжутся с Вами максимально быстро.

Корзина пуста

Особенности состояния гематотестикулярного барьера при различных формах мужского бесплодия
13.05.2013

Особенности состояния гематотестикулярного барьера при различных формах мужского бесплодия

Изучены иммуногистохимические (ИГХ) особенности экспрессии протеина Claudin 11 в ткани яичка 28 больных при экскреторно-обтурационной и секреторной формах мужского бесплодия. Обнаруженное достоверное снижение уровня ИГХ-экспрессии протеина Claudin 11 при секреторной форме мужского бесплодия и синдроме "только клетки Сертоли" по сравнению с экскреторно-обтурационным бесплодием. Результаты свидетельствуют о значительных нарушениях гематотестикулярного барьера, которые являются основой развития дополнительного иммунного компонента и углубление патологических изменений ткани яичка у больных при секреторной форме мужского бесплодия. Ключевые слова: мужское бесплодие, протеин Claudin 11.

В мужской репродуктивной системе существует гематотестикулярный барьер, образованный плотными контактами между клетками Сертоли (главный компонент) и структурами, которые отделяют зрелые сперматозоиды от периферической крови и предотвращают их взаимодействия с иммунокомпетентными клетками. Различные факторы, нарушающие этот барьер, приводят к возникновению иммунных реакций с образованием в крови антител к эпителию семенных канальцев и развития аутоиммунного бесплодия, поскольку сперматозоиды появляются в период полового созревания уже после того как сформировалась иммунная толерантность к собственным тканям организма. Антиспермальные антитела - это иммуноглобулины G, А и М, которые при взаимодействии со сперматозоидами способны их зафиксировать, аглютинизировать, блокировать процесс пенетрации (проникновение) в яйцеклетку, исключая процесс оплодотворения, или блокировать процесс имплантации эмбриона, даже в случае использования вспомогательных репродуктивных технологий. Лабораторная диагностика иммунной бесплодности на сегодняшний день включает исследование крови и семенной жидкости в антиспермальные антитела - иммуноглобулины G, А и М, хотя эти иммуноглобулины не являются специфичными маркерами аутоиммунного бесплодия. Кроме того, гематотестикулярный барьер выполняет трофическую функцию, а также обеспечивает в канальцах специфическую гормональную среду, необходимую для сперматогенеза. В связи с этим, нарушение гематотестикулярного барьера - важный фактор возникновения нарушений сперматогенеза (олиго-терато-и азооспермии). Поэтому состояние гематотестикулярного барьера - важный диагностический и прогностический фактор, который необходимо учитывать при лечении мужского бесплодия.

Молекулярными исследованиями последних лет установлено, что трансмембранные белки семейства claudins составляют основу межклеточных плотных запирающих контактов, образующих тканевые барьеры, в том числе гематотестикулярный барьер, существующий в мужской репродуктивной системе. Результаты недавно проведенных исследований свидетельствуют, что протеин Claudin 11, который экспрессирует преимущественно в плотных контактах между клетками Сертоли играет важную роль в регуляции гематотестикулярного барьера и может быть как маркером состояния гематотестикулярного барьера и сперматогенеза при мужском бесплодии различной этиологии.

Исследованый материал 28 больных азооспермией, полученный при инцизионной биопсии с последующим гистологическим и иммуногистохимическое исследование биоптата. Для установления клинического диагноза формы бесплодия пользовались общепринятой классификацией. При определении окончательного диагноза учитывали данные морфологического исследования биоптата яичка и результаты гормональных исследований. Согласно установленным диагнозам пациенты были разделены на три группы:

  • 1-я группа - 11 больных, у которых был установлен диагноз экскреторно-обтурационное бесплодие. Средний возраст больных - 33,6 года.
  • 2-я группа - 12 пациентов, у которых был установлен диагноз секреторное бесплодия с блоком сперматогенеза на уровне сперматогоний, сперматоцитов 1-го и 2-го порядка или сперматид. Средний возраст больных - 29,5 года.
  • 3-я группа - 5 пациентов, у которых был установлен диагноз секреторного бесплодия с синдромом «только клетки Сертоли». Средний возраст больных - 28,5 года.

Для гистологического исследования биоптаты ткани яичка фиксировали в жидкости Буэна и заливали в парафин. С парафиновых блоков изготавливали срезы толщиной 5 мкм., которые окрашивали гематоксилинэозином.

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ осуществляли с использованием стандартного авидинбиотинового метода. Для ИГХ-исследования биоптаты фиксировали в 12% забуференный формалин, заливали в парафин и изготавливали срезы толщиной до 5 мкм. Срезы инкубировали с первичными антителами Claudin 11 (DAKO, Glostrup, Дания) в разведении 1:50. В конце препараты проявляли 1-2 мин. в 0,05% растворе диаминбензидина (DAB), докрашивают гематоксилином и заключали в канадский бальзам. Как положительный контроль использовали срезы тканей с известным заранее высоким содержанием Claudin 11. Те же срезы служили отрицательным контролем, но без обработки первичными антителами. В каждом случае для ИГХ-исследования анализировали 12-16 срезов. Распространенность и интенсивность ИГХ-реакции оценивали полуколичественным методом в баллах. Распространенность реакции или количество поокрашенных ядер или цитоплазмы клеток оценивали от 0 до 3 баллов по следующим критериям: 0 - отсутствие клеток с видной окраской, 1 - окрашено менее 10% клеток, 2 - окрашено более 10%, но менее 50% клеток, 3 - равномерно окрашено более 50% клеток клеточного слоя. Интенсивность окраски ядер или цитоплазмы оценивали по следующим критериям: 0 - отсутствие видимой окраски, 1 - слабо окрашенные ядра или цитоплазма, 2 - умеренно окрашены ядра или цитоплазма, 3 - интенсивно окрашенные ядра или цитоплазма. Общий результат ИГХ-реакции определяли по показателям иммуногистохимического коэффициента (ИГХК) от 0 до 9 баллов, который получали перемножением оценок распространенности и интенсивности окраски. Проводили статистический анализ полученных результатов. При исследовании ИГХ-экспрессии протеина Claudin 11 в группе больных экскреторно-обтурационное бесплодие с сохраненным сперматогенеза (всего 11 пациентов), наблюдали умеренное мембранозно-цитоплазматические окраски (4-6 баллов) клеток Сертоли в 6 наблюдениях (54,5%), в 5 случаях (45,5%), было обнаружено выраженную мембранозно-цитоплазматическую экспрессию протеина Claudin 11 (7-9 баллов). Среднее значение ИГХК равнялось 7,4 ± 0,45 балла.

Клетки сперматогенного эпителия - сперматогоний, сперматоциты 1-го и 2-го порядка проявляли слабую мембранозно-цитоплазматическую экспрессию протеина Claudin 11 в 1-3 балла во всех 11 наблюдениях (100%) данной группы. Среднее значение ИГХК составило 2,1+0,18. Необходимо отметить, что сперматиды и зрелые сперматозоиды характеризовались отсутствием ИГХ-экспрессии протеина Claudin 11 (0 баллов) во всех 11 случаях (100%).

В эндотелиальных клетках перитубулярных гемокапилляров проявляли выраженную мембранозно-цитоплазматичную экспрессию протеина Claudin 11 (7-9 баллов) в 5 случаях (45,5%), а в 6 наблюдениях (54,5%) данной группы наблюдали умеренную мембранозно-цитоплазматическую экспрессию протеина Claudin 11 в 4-6 баллов. Среднее значение ИГХК равнялось 7,2 ± 0,45 балла.

В группе больных с секреторным бесплодием с блоком сперматогенеза на уровне сперматогоний, сперматоцитов 1-го и 2-го порядка или сперматид (всего 12 пациентов) наблюдали умеренную мембранозно-цитоплазматическую экспрессию протеина Claudin 11 (4-6 баллов) в клетках Сертоли в 8 наблюдениях (66,7%) в 4 случаях (33,3%) было выявлено слабую мембранозно-цитоплазматическую экспрессию протеина Claudin 11 (1-3 балла) в сустентоцитах. Среднее значение ИГХК составило 5,43 +0,42.

Клетки сперматогенного эпителия - сперматогоны и сперматоциты 1-го и 2-го порядка, обнаруженные в этой группе пациентов, характеризовались слабой мембранозно-цитоплазматической экспрессией протеина Claudin 11 в 1-3 балла во всех наблюдениях (100%) данной группы. Среднее значение ИГХК для этих клеток сперматогенного эпителия составило 1,5 +0,17.

В эндотелиальных клетках перитубулярных гемокапилляров проявляли умеренную мембранозно-цитоплазматическую экспрессию протеина Claudin 11 (4-6 балла) в 8 случаях (66,7%), а в 4 случаях (33,7%) данной группы наблюдали слабую мембранозно-цитоплазматическую экспрессию протеина Claudin 11 в 1-3 балла. Среднее значение ИГХК равнялось 5,3 ± 0,42 балла. В группе больных с секреторным бесплодием с синдромом "только клетки Сертоли" (всего 5 пациентов) в клетках Сертоли наблюдали слабые мембранозно-цитоплазматические окраски протеина Claudin 11 в 1-3 балла в 2 наблюдениях (40%), в 3 случаях (60%) мембранозно-цитоплазматическая экспрессия протеина Claudin 11 в сустентоцитах отсутствовала (0 баллов). Среднее значение ИГХК составил 0,8 ± 0,6 балла.

В эндотелиальных клетках перитубулярных гемокапилляров наблюдали слабую мембранозно-цитоплазматичную экспрессию протеина Claudin 11 в 1 -3 балла в двух наблюдениях (40%) данной группы, в других 60% случаев экспрессия протеина Claudin 11 отсутствовала (0 баллов). Среднее значение ИГХК также равно 0,8 ± 0,6 балла.

Таким образом, установлено статистически достоверное снижение показателей ИГХК-экспрессии протеина Claudin 11 в клетках Сертоли и эндотелиальных клетках перитубулярный гемокапилляров в группах больных секреторным бесплодием с блоком сперматогенеза на уровне сперматогоний, сперматоцитов 1-го и 2-го порядка или сперматида и с синдромом "только клетки Сертоли" по сравнению с пациентами с экскреторно-обтурационным бесплодием.

Современными молекулярными исследованиями установлено, что протеины семейства claudins - это трансмембранные белки, которые являются важнейшим компонентом межклеточных плотных запирающих контактов, выполняющих барьерную функцию, образуя тканевые барьеры в различных органах. Кроме них, в составе плотных контактов оказываются трансмембранный протеин occludin, цитоплазматические белки zonula occludens (ZO-1, ZO-2, ZO-3) и junctional adhesion molecule (JAM), но в значительно в меньшем количестве. Итак, клаудины являются главным компонентом межклеточных плотных запирающих контактов, молекула клаудина имеет четыре трансмембранных домены, два внеклеточные и одну внутриклеточную петли и N-и С-концы, что располагаются в цитоплазме. У человека известны 24 члена этого семейства. Но, именно Claudin 11 экспрессирует в плотных контактах между клетками Сертоли. Это специфический для гематотестикулярного барьера протеин.

Выявленные в нашем исследовании особенности ИГХ-экспрессии протеина Claudin 11 характерных для различных форм мужского бесплодия, свидетельствуют о значительных нарушениях гематотестикулярного барьера в группах больных с секреторным бесплодием с блоком сперматогенеза на уровне сперматогоний, сперматоцитов 1-го и 2 - го порядка или сперматида и с синдромом "только клетки Сертоли" по сравнению с пациентами с экскреторно-обтурационным бесплодием. Учитывая важные функции, которые выполняет Claudin 11 в формировании целостности гематотестикулярного барьера, становится очевидным, что повреждения компонента этого барьера лежат в основе развития иммунного компонента и углубления патологических изменений ткани яичка при мужском бесплодии.

Сниженния уровня ИГХ-экспрессии протеина Claudin 11 при секреторной форме мужского бесплодия и синдроме "только клетки Сертоли" свидетельствует о значительных нарушениях гематотестикулярного барьера, которые являются основой развития дополнительного иммунного компонента и углубление патологических изменений ткани яичка у больных при этих формах мужского бесплодия.

При морфологическом исследовании биоптата яичка целесообразно определение ИГХК-экспрессии протеина Claudin 11 как информативного диагностического и прогностического показателя состояния гематотестикулярного барьера, который необходимо учитывать при диагностике и лечении мужского бесплодия.

С.В. Базалицкая
Государственное учреждение «Институт урологии НАМИ Украины», г. Киев

Sam
13.11.2013

Уважаемая Базалицкая! Спасибо Вам, статья достаточно интересная с позиций медицины. Статистика мала, но это существенно не влияет на результат. С позиций генетики и биохимии барьера есть некоторые нюансы. Год назад 2 янки открыли механизм работы барьера и указали на важную роль белка клаудин 3, работающего в паре с клаудин 11, образую нечто похожее на шлюз. Я нашел в http://elementy.ru/news/431906 в пересказе Веры Башмаковой. Интересная работа. По генетике - еще одной причиной бесплодия является механизм модификации ДНК, тесно связанный с барьером. Полагаю, что он Вам и коллегам не знаком. Другой важный механизм бесплодия связан с клетками Лейдига, расположенных перед барьером. У Вас речь идет преимущественно о клетках Сертоли. С уважением - Сэм

Имя: *
Е-mail: *
Отзыв: *
Код защиты: * Сменить код
* - поля, обязательные для заполнения
Статьи
Инфектология и паразитология
Изменения языка при инфекционных заболеваниях
Изменения языка при инфекционных заболеваниях...
Большинство инфекционных заболеваний организма проявляется в поражении...
Медицинские праздники
Всемирный день стоматолога
Всемирный день стоматолога...
Сегодня, 9 февраля, весь мир празднует День стоматолога! Корнями данны...
Аллергология и иммунология
Уберегаем  организм от зимнего авитаминоза
Уберегаем организм от зимнего авитаминоза...
Вы ощущаете усталость, вялость и постоянную раздражительность? Организ...
Новые медицинские учреждения
  • Интернет-магазин
  • SKYDENT
  • «Аксимед» — Клиника современной неврологии
  • Студия красоты и развития
  • Алтес - Сумы
  • Мед Люкс Детокс
  • DietCenter
  • Лико-Мед
  • Сучасна стоматологія Денітка- Луцьк